性能參數
產品詳細描述
X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷
產品信息
產品描述
X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。基于這個特點，當pUC系列載體DNA以lacZ 缺欠細胞作為宿主進行轉化時，或M13噬菌體載體DNA進行轉染時，如果在培養基中加入X-Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據是否呈現白色而方便地挑選擇出基因重組體。
常用于β-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20 oC避光保存。
產品性質
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；
2）含有 X-Gal 的培養基 4℃避光保存，須在1周內使用。
配制儲存液
稱取200 mg X-Gal于15 mL 離心管，向其中加入10 mL DMF，旋渦震蕩使其充分溶解后于-20℃避光保存，正確操作下，有效期可達5-12個月，如小量頻繁使用，建議分裝成1 mL/管后避光凍存。
藍白斑篩選
1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養基溶液
1）高壓滅菌已加瓊脂的培養基，并冷卻到50℃左右。
2）每毫升培養基內加入10 μL20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達到1 mM）；
3）加入適量抗生素；
4）混勻后按照平板大小倒入適量培養基，待培養基冷卻至室溫后，接種細菌于37℃過夜培養。
2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面
1）于無菌超凈工作臺制備平板（如LB 瓊脂板）；
2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準備好的平板上；
【注】：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產生假陽性，因此，為了得到更好結果，建議后續操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。
3）37℃ 孵育直至所有液體被吸收（30 min或更長）。接種細菌于37℃過夜培養。
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